Microscope Zeiss Axio-Observer Z1 avec disque rotatif

ZeissZ1

Local : B-301-1
Support technique : Monique Vasseur et Nicolas Stifani
Mode d’emploi (à venir)

  • Microscope confocal multipoints, inversé
  • Disque rotatif à vitesse variable
  • Imagerie 6D (XYZTC et multipoint) avec triggering
  • Caméra EMCCD, 16 bit
  • FRAP, Photoactivation; TIRF (sur demande)
  • Lasers, roue de filtres à l’émission
  • Mise au point automatique (par IR et algorithme)
  • Platine motorisée (XY) et Piezo pour le Z
  • Incubateur (20-42°C) opaque à la lumière
Applications
  • Microscopie confocale haute vitesse pour cellules vivantes (Live cell), avec incubation (température et CO2)
  • Imagerie multidimensionnelle 6D à haute vitesse (temps d’expo. min. de 30 ms avec Yokogawa ; <30 ms avec triggering)
  • TIRF, FLIP, FRAP mono-région et de forme prédéfinie
  • Photoactivation (PA), photoconversion
  • Fond clair (pas de DIC)

Disque rotatif (Spinning disk)
  • Disque rotatif Yokogawa CSU-X1 avec des ouvertures (pinholes) de 50 µm de diamètre
  • La vitesse (de 1500 à 5000 rpm) s’ajuste automatiquement selon le temps d’exposition

FRAP, photoconversion et photoactivation
  • Module direct-FRAP pour la photomanipulation
  • Objectif recommandé pour la photomanipulation : 100x/1.46 alpha Plan Apochromat

Objectifs
  • 63x/1,46, alpha Plan-Apochromat korr M27 TIRF, 0,17 mm; WD 0,10 mm; immersion à l’huile (Zeiss 420780-9970-000)
  • 100x/1,46 alpha Plan Apochromat DIC M27; 0,17 mm; WD 0,11 mm; immersion à l’huile (Zeiss 420792-9800-000)
  • Condensateur en lumière transmise : Ouverture numérique de 0,55    WD 26 mm

Sources lumineuses
  • Lasers pour le disque rotatif (spinning disk) :
    • 405nm 50mW (OPSL laser)
    • 488nm 100mW (diode laser)
    • 561nm 40mW (diode laser)
    • 635nm 30mW (diode laser)
  • Lampe X-Cite series 120 Q d’Excelitas (lampe à arc de 120 W) pour l’épifluorescence aux oculaires
    Contrôle de l’intensité lumineuse par des filtres de densité neutre : 0%, 12%, 25%, 50% et 100%
  • Lampe halogène pour la lumière transmise

Détecteurs
  • Deux caméras EMCCD identiques (Evolve) permettent d’imager 2 canaux en simultané. Elles sont disponibles via les ports du disque rotatif et sont accessibles comme suit :
    • Levier vers le bas : « Camera-Left » seulement
    • Levier vers le haut (miroir dichroïque LP560): « Camera-Left » (< 560 nm) et « Camera-Back » (> 560 nm)
  • 2 Caméras EMCCD back-illuminated 16 bit, Evolve de Photometrics : 512×512 pixels de 16 µm chacun, 33 fps
    • Refroidie à -85°C, bruit de lecture (Readout noise) de 45 e- à 10 MHz ou de 32 e- à 5 MHz
    • Détection d’un photon à la fois, calibration du gain de la caméra avec Rapid-Cal
    • Possibilité d’utiliser le BERT (Background Event Removal Technology) pour diminuer le bruit de fond
    • Images rendues en valeurs d’intensité relative ou en nombre de photons captés avec QuantView

En option, et sur demande seulement, pour l’imagerie en épifluorescence plein champ via le port de droite du statif

  • Caméra CCD 12 bit, AxioCam MRm3 de Zeiss : 1388×1040 pixels de 6,45 µm chacun, 14 fps
    • Bruit de lecture (Readout noise) de 7,7 e- @ 25 MHz

Filtres
  • Roue de filtres à l’émission pour la Camera-Left (6 positions, 25 mm diam., délai de 33 ms entre positions adjacentes) :
    • DAPI (Zeiss 447964-9000-000) : BP 445/45  (422.5 – 467.5)
    • GFP (Zeiss 489038-8002-000) : BP 525/50  (500 – 550)
    • RFP (Semrock  BrightLine FE01 617/73) :  BP 617/73  (580.5 – 653.5)
    • CY5 (Zeiss (du cube 50) 488050-8003): BP 690/50  (665 – 715)
    • CY3.0 (Chroma 239042 HQ567/15m): BP 567/15 (560 – 576)
    • CY5.5 (Chroma ET720/60m 25 mm): BP 720/60 (690 – 750)
  • Coulisseau à l’émission pour la Camera-Back (1 position, 25 mm)
    • RFP (Semrock/AVR Optics FF01-607/70-25): BP 607/70 (572 – 642)
  • Disponibles sur demande:
    • QBP DAPI+GFP+CY3.5+CY5 (Zeiss 411060-0030-000) : BP 446/25 + BP 523/25 + BP 600/25 + BP 677/25
  • Miroir Dichroïque pour le disque rotatif (spinning disk)
    • QDM : RTFT 405+488+568+647
  • Cubes de filtres pour observation aux oculaires (à utiliser avec la lampe X-Cite 120Q)
    • DAPI (Zeiss Set 34, 1031-334): BP 390/22x    FT 420    BP 460/50m
    • GFP (Zeiss Set 10, 488010-0000):  BP 470/40x    FT 510     BP 540/50m
    • RFP (Zeiss Set 20, 488020-0000):  BP 546/12x     FT 560     BP 608/65m
  • Cubes de filtres pour le FRAP (à utiliser avec la FRAP laser Fiber)
    • Dichroïque seulement : LP 458
    • Semi-miroir TFT 80/20 : transmet à 80% (émission) et réfléchi à 20% (excitation)
  • Cubes de filtres pour le TIRF (à utiliser avec la TIRF laser Fiber)
    • CFP/GFP/DsRed shift free (Zeiss Set 76 HE, 489076-9901) : TBP 406+489+561 TFT 427+503+578  TBP 459+525+608
    • GFP/mRFP/Alexa633 (Zeiss Set 77 HE, 489077-0000): TBP 482+563+642 TFT 503+582+658  TBP 524+604+688
Précision de la platine et du moteur Z
  • Déplacements en XY : pas de 22 nm (22 nm step)
  • Déplacements en Z : pas de 50 nm (50 nm Z step)
  • Definite Focus : Autofocus avec LED IR de 835 nm

Incubation, température, CO2 et humidité
  • Cabinet-incubateur noir, englobant tout le microscope, avec contrôleur de température (°T) et CO2
    • TempModule S de Zeiss : réglage de °T ambiante à 100,0°C +/- 0,1°, mais °T permise < 42 °C
    • Heating Unit XL S2 de Zeiss : de 22 à 25°C au-dessus de la température ambiante
    • CO2 Module S avec bouteille d’humidification et couvercle à poser sur l’échantillon, CO2-cover HM, de Zeiss : mélangeur d’air avec contrôle de la concentration de CO2 (entre 0,0 et 10,0% en Vol%)

Contenants et porte-échantillon compatibles avec la platine (différents encarts)
  • Plaque multi-puits
  • Pétri de 35 mm de diamètre
  • Lame histologique

Logiciel
  • ZEN (blue) de Zeiss

Accessoires
  • Système de perfusion microfluidique EV-262 d’Onix/ CellAsic (Merck/MilliporeSigma au Canada)
    • Nécessite l’achat de plaque CellASIC spécifique au type cellulaire :
      • M04 : cellules de mammifère et cellules adhérentes
      • Y04 : cellules non-adhérentes de 4 à 9 µm de diamètre
      • B04 : cellules non-adhérentes de 0,7 à 3,5 µm de diamètre
      • C04 : Chlamydomonas ou autres flagellés non-adhérents
    • Changement du milieu et du CO2 par flux laminaire (2-30 µl/h) contrôlé par ordinateur
    • Ne nécessite que 300 µl de solution par puits
    • Compatible avec objectifs à immersion (le fond des puits est en verre 0,170 mm)

Support technique
  • Monique Vasseur, responsable de la plateforme de microscopie photonique
  • Nicolas Stifani, coordonnateur de microscopie avancée

Dernière mise à jour le 12 octobre 2018