SEC-MALS


Personnes ressources

Normand Cyr
Coordonnateur de la plateforme de biologie structurale
normand.cyr@umontreal.ca
514-343-6322
 
Pascale Legault
Professeur titulaire
pascale.legault@umontreal.ca

Chromatographie d’exclusion couplée avec la mesure de la diffusion de la lumière sous multiples angles (SEC-MALS)

Le SEC-MALS permet la détermination précise de la masse molaire absolue ainsi que du rayon de giration (Rg) moyen des biomolécules suivant une séparation par chromatographie liquide. La technique utilise la diffusion statique d’une source lumineuse à haute intensité à travers une solution de macromolécules. L’intensité de cette diffusion est ensuite détectée sous plusieurs angles, permettant ainsi un calcul précis de la masse molaire et du rayon de giration (Rg) moyen.

Description des équipements

Chromatographie analytique

Un système de chromatographie ÄKTAmicro (GE Healthcare) est utilisé pour permettre une séparation à haute résolution, et à des niveaux analytiques, de macromolécules telles protéines, ARN et ADN. La précision des pompes à faible débit rend possible l’utilisation de colonnes de chromatographie analytique et l’injection de petites quantités de matériel à analyser.

Détecteur de diffusion de la lumière sous plusieurs angles (MALS)

Un détecteur de diffusion de la lumière sous multiples angles Dawn HELEOS II (Wyatt Technology) est branché à la sortie de la colonne de chromatographie. La présence de plusieurs détecteurs permet la détection de la diffusion de la lumière sous 18 angles différents offrant une sensibilité accrue (aussi peu que 200 ng BSA en solution), une large plage de détermination du poids moléculaire (200 Da à 1000 MDa) et de la taille (Rg 10 à 500 nm) des macromolécules.

Détecteur de l’indice de réfraction différentiel (dRI)

Finalement, un détecteur à réfractomètre différentiel OptiLab T-rEX (Wyatt Technology) permet la détermination de la concentration des biomolécules à la sortie de la colonne de séparation.

Colonnes disponibles

Plusieurs colonnes analytiques sont disponible pour l’analyse SEC-MALS des macromolécules.

  • Exclusion stérique / filtration sur gel (SEC)
    • Superdex 200 Increase, 10×300
    • Superose 12, 3.2×300
    • Superdex 200 Increase, 3.2×300
    • Superdex 75, 3.2×300
    • Superose 6 Increase, 3.2×300
  • Échange d’ions (IEX)
    • Mono S, 1.6×5
    • Mono Q, 1.6×5

Logiciels

ASTRA 6.1.6.5 (Wyatt Technology)