Microscope confocal Olympus Fluoview FV300

• Microscopie confocale point par point (voir les applications du modèle FV300)
• Différentes possibilités de scan: zoom, rotation du champ, ligne (droite ou libre), un point en Z ou dans le temps
• Imagerie multidimensionnelle 5D pour 2 couleurs en simultané ou en séquentiel (manuel dès que plus de 2 couleurs)
• FRET, FRAP multi-région et de forme définissable, avec possibilité de varier l’intensité d’excitation d’une ROI à l’autre
• Fond clair et DIC

• 5 ouvertures confocales (CA : Confocal Aperture) à changer manuellement. Les 5 grosseurs de sténopé (pinhole size) sont :
  • 60 µm
  • 100 µm : idéal pour les objectifs 20x et 60x
  • 150 µm : idéal pour l’objectif 40x
  • 200 µm : si le signal est faible
  • 300 µm : si le signal est très faible

• 20x/0,50, U Plan Fl, DIC, couvre-objet de 0,17 mm;
• 40x/0,75, U Plan Fl, DIC, couvre-objet de 0,17 mm;
• 60x/1,40, Plan Apochromat BFP1 C2, DIC, 0,17 mm,  immersion à l’huile
• Possibilité de zoom optique de 1x à 10x
• Taille des pixels selon zoom

• Lasers pour la microscopie confocale et les images en lumière transmise:
  • 458, 488,514 nm  35 mW   (laser Argon multi-lignes)
  • 543 nm                  1,5 mW   (laser Helium-Neon)
  • 633 nm                   12 mW   (laser Helium-Neon)

NB: il est impossible de voir du DAPI sur ce microscope (pas de laser UV)

• Lampe au mercure (lampe à arc de 120 W) pour l’épifluorescence aux oculaires
• Lampe halogène avec fibre optique pour la lumière transmise

• Tubes photomultiplicateurs (PMTs) 12 bit: 256×256 à 2048×2048 pixels, 4 fps à 512×512
  • 2 PMT pour la fluorescence
  • 1 PMT pour la lumière transmise
  • Vitesse d’intégration réglable (Fast to Slow Scan speeds)

• Filtres à l’émission (tirettes à déplacement manuel) pour la microscopie confocale :
  • CFP: BP 488/15
  • GFP: LP 510
  • GFP: BP 515/20
  • YFP: BP 550/30
  • RFP: BP 603/55
  • CY5: LP 660
• Miroirs Dichroïques pour la microscopie confocale (2 tirettes à 3 positions chacune)
  • SDM 570/630 :
    • Miroir (enfoncé) : toute l’émission se rend au PMT 1 seulement
    • 570 (au milieu) : l’émission est séparée ainsi : < 570 nm au PMT1, et > 570 nm au PMT2
    • 630 (tiré) : l’émission est séparée ainsi : < 630 nm au PMT1, et > 630 nm au PMT2
  • DM 515 :
    • Miroir (enfoncé) : toute l’émission se rend au PMT 1 seulement
    • 515 (au milieu) : l’émission est séparée ainsi : < 515 nm au PMT1, et > 515 nm au PMT2
    • vide (tiré) : toute l’émission se rend au PMT 2 seulement
• Cubes de filtres pour observation aux oculaires (avec la lampe au mercure) Tourelle à 6 positions :
  • 1: vide, pour observer en fond clair ou pour imager en microscopie confocale
  • 2: Analyseur pour observer en DIC aux oculaires
  • 3 : FITC (Carsen Group U-N41001) : BP HQ 480/40x; Q LP 505; HQ 535/50m
  • 4: TRITC (Carsen Group U-N41002): BP HQ 535/50x; Q LP 565; HQ 610/75m
  • 5: Cy5 (Carsen Group U-N41008):  BP HQ 620/60x; Q LP 660; HQ 700/75m
  • 6: CFP (Carsen Group U-N31044v2):  BP 426/20x; DC LP 455; BP 480/40m
• Prisme de Wollaston (tirette à 2 positions):
  • Normal (tiré) : DIC pour les objectifs 20x et 40x
  • BFP1 (enfoncé) : DIC pour l’objectif 60x

• Platine XY manuelle
• Moteur Z

• L’incubation entre 20-50^oC est possible en utilisant la chambre de perfusion FCS2 de Bioptechs (chambre formée entre 2 lamelles de 40 mm diam.). Le chauffe-objectif est nécessaire si la chambre FCS2 est utilisée avec un objectif à immersion.

• Lame histologique
• Pétri de 35 mm de diamètre avec fond en lamelle de verre de 0,17 mm
• Chambre FCS2 de Bioptechs

• Fluoview d’Olympus (version originale 4.3)

• Chambre environnementale FCS2 de Bioptechs (FCS2 : Focht Live-Cell Chamber System)
  • Chambre de perfusion fermée compatible avec le DIC, la fluorescence et les objectifs à immersion
  • Micro-perfusion par un système de Microaqueduct: 0,2 – 180 ml/h
  • Échange complet du milieu possible par la pompe péristaltique  en 1 sec. (max.)
  • Contrôle de la température de la chambre : ambiante – 50^oC +/-0,1^oC
  • Volume de la chambre : 6,6 – 706 µl selon l’épaisseur du joint de montage (50 – 1000 µm)
  • Champ visuel : 22 mm de diamètre
  • Nécessite culture sur lamelle de 40 mm de diamètre et 0,17 mm d’épaisseur
  • Chauffe-objectif compatible avec les objectifs de 26 à 35 mm de diamètre (100x à immersion)
  • Incubateur Boekel: mini-étuve portative pour garder le milieu de perfusion à la bonne température

• Monique Vasseur, responsable de la plateforme de microscopie photonique
• Nicolas Stifani, Coordonnateur Microscopie avancée