Microscope super résolution Diskovery Flex de Quorum

• Microscopie super-résolution pour cellules fixées ou vivantes (mais sans température ni CO2)
• Imagerie multimodale (confocal multipoints, TIRF 4 couleurs, super résolution et épifluorescence sur le même champ)
• dSTORM 2D et 3D (3D direct Stochastic Optical Reconstruction Microscopy)
• PALM 3D (3D Photo Activated Localization Microscopy)
• Photomanipulation
• Confocal multipoints (Nipkow Spinning Disk)
• TIRF multi couleurs et à profondeur réglable (TIRF : Total Internal Reflection Fluorescence)
• Épifluorescence à champ large (wide-field)
• Fond clair (Brightfield) et polarisation seulement. Pas de DIC ni de contraste de phase
• Imagerie multidimensionnelle 5D (XYZTC) et multimodale (option de deux caméras en simultané)

• dSTORM et PALM avec l’algorithme Wave Tracer et le module Diskovery d’Andor
• 3D dSTORM avec lentille astigmatique placée manuellement devant la caméra horizontale
• La lentille astigmatique est amovible afin de pouvoir utiliser la caméra pour les autres applications

Module Diskovery d’Andor

• Disque rotatif Nipkow (à un seul disque; pas de 2e disque avec microlentilles) et amovible
• Disque à vitesse de rotation fixe : 5000 rpm

• 3 choix de grosseurs de pinhole sur le même disque :
  • 33 µm (grande zone (1/2) sur le rayon interne du disque) : idéal pour les objectifs 63x et 20x
  • 50 µm(petite zone (1/4) au milieu): idéal pour le 100x et le 20x
  • 75 µm (petite zone (1/4) sur le rayon externe du disque) : si manque de signal

Module Diskovery d’Andor

• TIRF 4 couleurs; avec les lasers 405, 488, 561 et 637 nm (mais pas avec le 515 nm)
• Multimodale TIRF avec épifluorescence; ex. GFP en TIRF + mCherry en épifluorescence (acquis en séquentiel sur une caméra)
• Profondeur de pénétration réglable : 80 à 800 nm
• Le TIRF est configuré uniquement pour l’objectif 63x

• 20x/0.70 HC Plan Apo; couvre-objet de 0,17 mm, distance de travail (WD) 0,59 mm (Leica 11506166)
• 63x/1.47 oil HCX Plan Apo corr TIRF; couvre-objet 0,10 – 0 22 mm, WD 0,10 mm; immersion à l’huile (Leica 11506319)
• 100x/1.47 oil HCX Plan Apo corr TIRF; couvre-objet 0,10 – 0 22 mm, WD 0,10 mm; immersion à l’huile (Leica 11506318)

NB : Le condensateur à une ouverture numérique de 0.55. Le diaphragme d’ouverture est motorisé.

• Système Borealis d’Andor pour combiner et moduler les lasers, pour tous les modes d’imagerie sauf pour le TIRF
  • Illumination uniforme (moins de 8% de variation dans un champ) et de forme carrée
  • Le champ illuminé est carré (4 grandeurs) – NB : sauf pour le TIRF qui utilise une autre fibre
  • La puissance d’illumination varie selon le carré choisi : Plus le carré est petit, plus la lumière est concentrée

NB : La sélection de la grandeur du carré étant lente à changer, il est conseillé d’utiliser la même grandeur de champ d’illumination durant tout un protocole expérimental.

• Module iLas Pulse pour permettre la phtomanipulation (dans le moment qu’avec le laser 405 nm)
• Lasers (# 1A, Spectral d’Andor) pour la super résolution, le confocal multipoints, le TIRF et l’épifluorescence à champ large :
  • Laser 405 nm, 100 mW, diode OPSL (ON/OFF en ms)
  • Laser 488 nm, 150 mW, diode OPSL (ON/OFF en ms)
  • Laser 561 nm, 150 mW, (nécessite réchauffement de 2 minutes et un obturateur pour la capture d’images)
  • Laser 637 nm, 140 mW, diode OPSL (ON/OFF en ms)

• Lasers (# 1B, Spectral d’Andor) pour la super résolution, le confocal et l’épifluorescence mais NON DISPONIBLE POUR LE TIRF:
  • Laser 515 nm, 150 mW (nécessite réchauffement de 2 minutes et un obturateur pour la capture d’images)

• Lampe halogène pour la lumière transmise

• 2 Caméras BSI sCMOS identiques: Prime 95B de Photometrics
  • BSI: Backside illuminated;  >95% QE
  • 1200×1200; 11 µm;  16 bit
  • 41 fps (full chip, 16 bit); 82 fps (full chip, 12 bit); 768 fps (1200×128, 12 bit)
  • Binning: 2×2 on FPGA (2×2 on-camera simulated binning)
  • Readout mode: Rolling shutter or Global shutter
  • Full well capacity: 80 000 e- (gain combiné), 4 500 e- (à gain élevé)
  • Refroidie de -10^oC; bruit d’intégration (Readout noise) < 1,8 e- rms

La super-résolution 3D n’est possible que sur la caméra horizontale.

• Cubes de filtres (tourelle motorisée à 6 positions) :
  • DAPI (Chroma 49000 ET): BP AT 350/50x T LP 400 BP ET 460/50m
  • GFP (Chroma 49002 ET): BP ET 470/40x T LPxr 495 BP ET 525/50m
  • YFP (Chroma 49003 ET): BP ET 500/20x T LP 515 BP ET 535/30m
  • Cy5.0 (Chroma 49006 ET): BP ET 620/60x T LPxr 660 BP ET 700/75m

• Roue de filtres à l’émission (8 positions, filtres de 25 mm de diamètre), amovible et interchangeable entre caméras
  • DAPI (Chroma ET450/50m) : BP ET 450/50
  • GFP (Chroma ET525/50m) : BP ET 525/50
  • CY3 (Chroma ET600/50m) : BP ET 600/50
  • CY5.0 (Chroma ET700/75m) : BP ET 700/75
  • mCherry (Chroma ET620/60m) : BP ET 620/60
  • YFP (Chroma ET540/30m) : BP ET 540/30
  • Obturateur (Shutter)
  • Vide (empty)
  • Filtre à l’émission, sur tirette amovible
  • GFP (Chroma ET525/50m) : BP ET 525/50

• Déplacement manuel en XY
• Déplacements en Z du microscope : motorisé avec pas de 50 nm
• Autofocus du microscope (AFC) et autofocus avec algorithme de Metamorph

• Pas de boite d’incubation globale mais possibilité d’utiliser la chambre amovible FCS2 de Bioptechs

• Chambre environnementale FCS2 de Bioptechs (FCS2 : Focht Live-Cell Chamber System)
  • Chambre de perfusion fermée compatible avec le DIC, la fluorescence et les objectifs à immersion
  • Micro-perfusion par un système de Microaqueduct: 0,2 – 180 ml/h
  • Échange complet du milieu possible par la pompe péristaltique en 1 sec. (max.)
  • Contrôle de la température de la chambre : ambiante – 50^oC +/-0,1^oC
  • Volume de la chambre : 6,6 – 706 µl selon l’épaisseur du joint de montage (50 – 1000 µm)
  • Champ visuel : 22 mm de diamètre
  • Nécessite culture sur lamelle de 40 mm de diamètre et 0,17 mm d’épaisseur
  • Chauffe-objectif compatible avec les objectifs de 26 à 35 mm de diamètre (100x à immersion)
  • Incubateur Boekel: mini-étuve portative pour garder le milieu de perfusion à la bonne température

• Lame et lamelle
• Pétri de 36 mm de diamètre avec fond en lamelle de verre de 0,170 mm
• Lame multipuits avec fond en lamelle de verre
• Chambre FCS2 de Bioptechs

• Metamorph (incluant Wave Tracer) de Molecular Devices

• Nicolas Stifani, coordonnateur de la Microscopie avancée, Faculté de médecine
• André Lévesque, responsable des plateformes de microscopie et d’histologie du CIB