Local : 3129, pav. J.-Armand-Bombardier
Support technique : Nicolas Stifani et Emmanuel Bajon
Mode d’emploi
- Système confocal à haut débit pour plaques et lames, inversé
- Imagerie 6D (XYZTC, multipoints) et « Stitching »
- Caméra sCMOS, 16 bit
- Mise au point automatique (par IR et algorithme)
- Lasers, roue de filtres à l’émission
- Platine motorisée (XY) et Piezo pour le Z
- Incubateur (20-41°C) opaque à la lumière
Applications
- Système confocal à haut débit et à haut-contenu pour cellules vivantes ou fixées, avec incubation (température)
- Débit : 5000 champs de données/heure pour 4 longueurs d’onde/champ/puits (puits d’une plaque de 96 puits)
- Délai minimum : 70 ms/image (au plus rapide)
- Imagerie multidimensionnelle (XYZTC et multipoints) pour une plaque multi-puits (6 à 1536 puits) ou pour 4 lames à la fois
- Mode d’imagerie, champ large ou confocal, interchangeable d’une couleur à l’autre (sauf avec l’objectif 10x)
- Imagerie cinétique (Timelapse) avec ajout de réactifs à des intervalles allant de 500 ms à 8 heures
- Fond clair (contraste de phase et DIC par algorithme)
- Prévisualisation du signal de toute la plaque ou de quelques puits
- Possibilité de compter les cellules et d’arrêter la capture d’images après qu’un nombre défini de cellules soient imagées
- Reconstruction mosaïque (Stitching) après importation dans In Cell Investigator
Objectifs
- 10x/0,45 Plan Apo de Nikon, WD 4.0 mm (mode confocal non disponible pour cet objectif)
- 20x/0,75 Plan Apo DIC N2 de Nikon, épaisseur de couvre-objet 0,17 mm, WD 1.0 mm
- 40x/0,60 Plan Fluor, Ph2 ADL ELWD avec une bague correctrice 0-2,0 mm; WD 3,7-2,7
- 60x/0,95, Plan Apo de Nikon, avec collier correcteur (ASAC) 0.11-0,23 mm, WD 0,15 mm
Sources lumineuses
- Lasers pour l’épifluorescence et la microscopie confocale multi-lignes
(illumination ligne par ligne) :- 405nm 100mW (diode laser)
- 488nm 25mW (diode laser)
- 561nm 30mW (DPSS laser)
- 642nm 50mW (diode laser)
- LED pour la lumière transmise
Détecteurs
- Caméra sCMOS faible bruit, 16 bit, 2560×2160 pixels de 6,5 µm chacun, 20 fps
- Refroidie à 5°C, bruit d’intégration (Readout noise) 1,4 e-
- Détection ligne par ligne (Rolling shutter)
- Champ visuel à 10x : 2,78 mm2
- Temps d’exposition minimum : 70 ms
Filtres
- Miroir polychroïque :
- Réflexion (pour lasers 405+488+561+640) : BP 309/40 + BP 482/18 + BP 564/9 + BP 640/14
- Transmission : BP 446/32 + BP 524/42 + BP 600/36 + BP 732/137
- Roue de filtres à l’émission :
- DAPI : BP 445/50
- GFP : BP 525/20
- DsRed: BP 605/52
- CY5.0: BP 707/72
- CY5.5: BP720/60
- Configuration des lasers et filtres pour les fluorophores
Précision de la platine et du moteur Z
- Déplacements en XY : pas de 500 nm (500 nm step)
- Déplacements en Z : pas de 25 nm (25 nm Z step)
- Mise au point automatique (HWAF : HardWare laser AutoFocus) avec un laser diode 785 nm de 50 mW
Contenants et porte-échantillon compatibles avec la platine (différents encarts)
- Plaque multi-puits : 6, 12, 24, 48, 96, 384 et 1536 puits, à fond transparent (idéalement de 0,17 mm pour le 60x et 100x)
- Lame histologique
- Lame multi-puits avec fond en lamelle de verre (du style Ibidi)
Logiciel
- Logiciel d’acquisition In Cell Analyzer de GE Healthcare pour la capture d’images à haut débit et haut-contenu
Accessoires et logiciels pour le traitement des images
- In Cell Investigator de GE Healthcare pour l’analyse des images (3 niveaux)
- Niveau 1 : 15 mesures par puits
- Niveau 2 : > 75 mesures, cellule par cellule
- Niveau 3 : > 75 mesures, cellule par cellule sur plusieurs canaux/couleurs
- Spot Fire de GE Healthcare pour transposer les statistiques de plusieurs puits en un graphique
- In Cell Miner de GE Healthcare pour gérer la base de données par projet, par plaque, par protocole…
- In Cell 3D Viewer de GE Healthcare
- Images et données compatibles avec Cell Profiler (logiciel gratuit du NIH www.cellprofiler.org )
Support technique
- Nicolas Stifani, coordonnateur principal microscopie, Faculté de médecine
- André Lévesque, responsable des plateformes de microscopie et d’histologie du CIB
Dernière mise à jour : 27 octobre2023