Normand Cyr
Coordonnateur de la plateforme de biologie structurale
normand.cyr@umontreal.ca
514-343-6322
Pascale Legault
Professeur titulaire
pascale.legault@umontreal.ca
Le titrage calorimétrique isotherme (ITC) est une technique biophysique utilisée dans l’étude quantitative des interactions biomoléculaires. La chaleur libérée ou absorbée au moment de la liaison est mesurée directement, et permet de déterminer simultanément tous les paramètres thermodynamiques de la liaison, ainsi que l’affinité et la stœchiométrie de l’interaction. Cette mesure s’effectue en solution, sans modification préalable des partenaires.
MicroCal ITC200
Le MicroCal iTC200 fournit un aperçu détaillé des paramètres thermodynamiques d’une liaison. Le système dispose d’une cellule d’échantillonnage de 200 μl, et d’une seringue de titrage de 50 µl, et permet de mesurer directement la chaleur absorbée ou dégagée par le mélange de quantités précises de réactifs lors de l’expérience.
L’analyse des données est effectuée à l’aide du logiciel Origin™, dans lequel l’utilisateur obtient la stœchiométrie (n), la constante de dissociation (KD) et l’enthalpie (ΔH) de l’interaction. Le logiciel Origin peut également être utilisé pour ajuster des modèles plus complexes de liaison (deux sites, compétition etc.).
Il est aussi possible d’utiliser le logiciel de contrôle de l’ITC pour simuler une expérience et déterminer les concentrations de récepteur et ligand optimales à utiliser.
Logiciels
- MicroCal iTC200 Control Software
- OriginLab Origin 7.0