Microscope Zeiss Axio-Observer Z1 avec disque rotatif

ZeissZ1

Local : B-301-1
Support technique : Pascal Raymond
Mode d’emploi (à venir)

  • Microscope confocal multipoints, inversé
  • Disque rotatif à vitesse variable
  • Imagerie 6D (XYZTC et multipoint) avec triggering
  • Caméra EMCCD, 16 bit
  • FRAP, Photoactivation; TIRF (sur demande)
  • Lasers, roue de filtres à l’émission
  • Mise au point automatique (par IR et algorithme)
  • Platine motorisée (XY) et Piezo pour le Z
  • Incubateur (20-42°C) opaque à la lumière


Applications
  • Microscopie confocale haute vitesse pour cellules vivantes (Live cell), avec température
  • Imagerie multidimensionnelle 6D à haute vitesse (temps d’expo. min. de 30 ms avec Yokogawa ; <30 ms avec triggering)
  • TIRF, FLIP, FRAP mono-région et de forme prédéfinie
  • Photoactivation (PA), photoconversion
  • Fond clair

Disque rotatif (Spinning disk)
  • Disque rotatif Yokogawa CSU-X1 avec des ouvertures (pinholes) de 50 µm de diamètre
  • La vitesse (de 1500 à 5000 rpm) s’ajuste automatiquement selon le temps d’exposition

Objectifs
  • 63x/1,46, alpha Plan-Apochromat korr M27 TIRF, 0,17 mm; WD 0,10 mm; immersion à l’huile (Zeiss 420780-9970-000)
  • 100x/1,46 alpha Plan Apochromat DIC M27; 0,17 mm; WD 0,11 mm; immersion à l’huile (Zeiss 420792-9800-000)

Sources lumineuses
  • Lasers pour le disque rotatif (spinning disk) :
    • 405nm 50mW (OPSL laser)
    • 488nm 100mW (diode laser)
    • 561nm 40mW (diode laser)
    • 635nm 30mW (diode laser)
  • Lampe X-Cite series 120 Q d’Excelitas (lampe à arc de 120 W) pour l’épifluorescence aux oculaires
  • Lampe halogène pour la lumière transmise

Détecteurs
  • Caméra EMCCD back-illuminated 16 bit, Evolve de Photometrics : 512×512 pixels de 16 µm chacun, 33 fps
    • Refroidie à -85°C, bruit de lecture (Readout noise) de 45 e- à 10 MHz ou de 32 e- à 5 MHz
    • Détection d’un photon à la fois, calibration du gain de la caméra avec Rapid-Cal
    • Possibilité d’utiliser le BERT (Background Event Removal Technology) pour diminuer le bruit de fond
    • Images rendues en valeurs d’intensité relative ou en nombre de photons captés avec QuantView

En option, et sur demande seulement, pour l’imagerie en épifluorescence à champ large via le port de droite

  • Caméra CCD 12 bit, AxioCam MRm3 de Zeiss : 1388×1040 pixels de 6,45 µm chacun, 14 fps
    • Bruit de lecture (Readout noise) de 7,7 e- @ 25 MHz

Filtres
  • Roue de filtres à l’émission pour le disque rotatif (spinning disk) (délai de 33 ms entre positions adjacentes) :
    • DAPI (Zeiss 447964-9000-000) : BP 445/45
    • GFP (Zeiss 489038-8002-000) : BP 525/50
    • RFP (Zeiss 489063-80002-000): BP 629/62
    • CY5.5 (Chroma ET720/60m 25 mm): BP ET720/60
    • GFP + CY5 (Zeiss 489061-8003-000) : BP 527/54 + BP 645/60
    • DAPI+GFP+CY3.5+CY5 (Zeiss 411060-0030-000) : BP 446/25 + BP 523/25 + BP 600/25 + BP 677/25
  • Miroirs Dichroïques pour le disque rotatif (spinning disk) (tourelle à 3 positions)
    • QDM : RTFT 405+488+568+647
  • Cubes de filtres pour observation aux oculaires (avec la lampe X-Cite 120Q)
    • DAPI (Zeiss Set 34, 1031-334): BP 390/22x FT 420 BP 460/50m
    • GFP (Zeiss Set 10, 488010-0000): BP 470/40x FT 510 BP 540/50m
    • RFP (Zeiss Set 20, 488020-0000): BP 546/12x FT 560 BP 608/65m
  • Cubes de filtres pour le TIRF (avec les lasers)
    • CFP/GFP/DsRed shift free (Zeiss Set 76 HE, 489076-9901) : TBP 406+489+561 TFT 427+503+578 TBP 459+525+608
    • GFP/mRFP/Alexa633 (Zeiss Set 77 HE, 489077-0000): TBP 482+563+642 TFT 503+582+658 TBP 524+604+688

Précision de la platine et du moteur Z
  • Platine XYZ automatisée MS2000 d’ASI
  • Déplacements en XY : pas de 22 nm (22 nm step)
  • Déplacements en Z : pas de 50 nm (50 nm Z step)
  • Autofocus avec LED IR

Incubation et perfusion microfluidique
  • Cabinet-incubateur noir, englobant tout le microscope, avec contrôleur de température (°T) (pas de CO2)
    • TempModule S de Zeiss : réglage de °T ambiante à 100,0°C +/- 0,1°, mais °T permise < 42 °C
    • Heating Unit XL S2 de Zeiss : de 22 à 25°C au-dessus de la température ambiante
  • Perfusion microfluidique possible en installant le système EV-262 d’Onix/ CellAsic

Contenants et porte-échantillon compatibles avec la platine (différents encarts)
  • Plaque multi-puits
  • Plaque CellASIC
  • Pétri de 35 mm de diamètre
  • Lame histologique

Logiciel
  • ZEN (blue) de Zeiss

Accessoires
  • Système de perfusion microfluidique EV-262 d’Onix/ CellAsic
    • Nécessite l’achat de plaque CellASIC spécifique au type cellulaire :
      • M04 : cellules de mammifère et cellules adhérentes
      • Y04 : cellules non-adhérentes de 4 à 9 µm de diamètre
      • B04 : cellules non-adhérentes de 0,7 à 3,5 µm de diamètre
      • C04 : Chlamydomonas ou autres flagellés non-adhérents
    • Changement du milieu et du CO2 par flux laminaire (2-30 µl/h) contrôlé par ordinateur
    • Ne nécessite que 300 µl de solution par puits
    • Compatible avec objectifs à immersion (le fond des puits est en verre 0,170 mm)

Support technique
  • Pascal Raymond, agent de recherche dans le laboratoire du Dr D. Zenklusen